¿Podríamos decir que hay dos tipos de embriólogos según el tipo de selección espermática que realicen? Parece una pregunta un poco de broma, pero normalmente, los laboratorios suelen apostar por preparar siempre la muestra seminal de la misma forma, aunque actualmente, la flexibilidad va en aumento.
Una buena técnica de selección espermática debe eliminar el plasma seminal, espermatozoides muertos y otras células, además de conseguir concentrar espermatozoides con buena movilidad y morfología.
Las dos técnicas de selección espermática más usadas en los laboratorios de reproducción asistida son el gradiente de densidad y el Swim-up. ¿Pero se pueden utilizar de manera indiferente, o es recomendable usar cada una según las características de la muestra?
Vamos a conocer un poco más sobre cómo se realizan ambas:
–Swim-up:
Extraído de (4).
Una vez recogida la muestra, se coloca en un tubo y se mezcla con medio de cultivo. A continuación, se centrifuga durante varios minutos y posteriormente, se retira el sobrenadante con ayuda de una pipeta, intentando que el pellet que queda en el fondo no se altere. Luego, se vierten unos 0.5 ml de medio de cultivo muy lentamente por las paredes del tubo, con ayuda de una pipeta. Por último, se deja incubar la muestra en un ángulo aconsejable de unos 45º durante unos 45 minutos. Finalmente, se recoge el sobrenadante en otro tubo y se toma una alícuota que se analiza al microscopio para ver la calidad de la muestra.
En este caso, lo que se consigue es concentrar la parte celular de la muestra en el fondo del tubo, formando un pellet que contiene espermatozoides y resto de células del eyaculado. Al dejar incubar el pellet con el medio de cultivo, los espermatozoides comienzan a nadar hacia la superficie, quedando en el pellet, el resto de células y los espermatozoides con peor movilidad y morfología.
-Gradientes de densidad:
En este caso, primero se debe preparar el tubo donde vamos a procesar la muestra. Para ello, se utilizan suspensiones coloidales con partículas de sílice, con diferente densidad. En el fondo se coloca un gradiente entre un 70-95%, sobre él se coloca otro que suele estar al 40%. Posteriormente, se coloca la muestra seminal y se centrifuga. En este caso, lo que debemos recoger con la pipeta es el pellet que se forma al final del tubo. A la muestra obtenida se le añaden unos 0,5 ml de medio de cultivo y se centrifuga. Por último se retira el sobrenadante y se resuspende la muestra que queda en el pellet con un pequeño volumen de medio de cultivo y ya se puede analizar una alícuota en el microscopio.
Al utilizar gradientes de densidad, conseguimos que los espermatozoides con mejor movilidad y morfología sean capaces de traspasar ambos gradientes, llegando al fondo del tubo. Esto es debido a que los espermatozoides maduros tienen una mayor densidad y por tanto, pasarán con más facilidad por los diferentes gradientes, quedando retenidos así, en las anteriores interfaces, los espermatozoides con defectos y otras células del eyaculado.
Vemos que la forma de trabajar con la muestra es diferente, pero también lo son sus ventajas y desventajas?
Estas técnicas de selección espermática son rápidas y sencillas de realizar, además, el Swim-up es muy económico. Sin embargo, con el gradiente se consigue una mayor cantidad de espermatozoides móviles con morfología normal y con menor número de aneuploidías o diploidías. Ambas técnicas, además evitan la aparición de especies reactivas del oxígeno (ROS) y fragmentación espermática del ADN. Por último, el gradiente es una técnica más sencilla de estandarizar en los laboratorios.
Respecto a las desventajas, ambas presentan dificultades a la hora de procesar muestras con alta viscosidad. El Swim-up, presenta una baja eficiencia en separar los espermatozoides más activos de otros inmaduros u otro tipo de células. En el gradiente, se suelen obtener muestras más limpias, pero si se sobrecargan mucho con la muestra, pueden aparecer agregaciones que impidan el paso de los espermatozoides sanos a la parte inferior del tubo.
El manual de la OMS de 2010, hace referencia a que para muestras normozoospérmicas, el tratamiento Gold Standar para su procesado sería el Swim-up, sin embargo, para muestras con alteración en la movilidad, concentración o morfología, se recomienda realizar gradiente de densidad.
Si bien, cabe destacar que existen muchas más formas de selección espermática, pero para realizar alguna de ellas, previamente la muestra deber ser procesada con Swim-up o gradientes, como es el caso de la IMSI, o son técnicas ya mucho más costosas, como el MACS. Además, se están desarrollando nuevas tecnologías como la microfluidómica.
Y tú, ¿eres más de gradiente o de Swim-up?
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Bibliografía:
- Sperm selection strategies and their impact on assisted reproductive technology outcomes.Pinto S, Carrageta DF, Alves MG, Rocha A, Agarwal A, Barros A, Oliveira PF. Andrologia. 2021 Mar; 53(2):e13725. doi: 10.1111/and.13725. Epub 2020 Jun 28. PMID: 32596880.
- ESHRE Guideline Group on Good Practice in IVF Labs, De los Santos, M. J., Apter, S., Coticchio, G., Debrock, S., Lundin, K., Vermeulen, N. (2016). Revised guidelines for good practice in IVF laboratories (2015). Human Reproduction , 31(4), 685–686. https://doi.org/10.1093/humrep/dew016
- World Health Organization (WHO). (2010). WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen . 5th edn. (p. 287). World Health Organization.
- Manuel práctico de esterilidad y reproducción humana. Remohí, J., Cobo A., Romero, J., de os Santos, M.J., Pellicer, A. Ed. McGrawHil, 3ª ed (2008).
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